ژنتیک دامپزشکی

کارهای عملی در این کار گاههای آموزشی با دو پلاسمید انجام میگیرد:

الف) پلاسمید pBR322  این پلاسمید توسط فرانسیسکو بولیوار و همکاران طراحی و ساخته شده است و همه خصوصیات یک پلاسمید خوب را دارا میباشد . وزن مولکولی پایین (4363bp ) دارد و برای تعدادی از Restiction Enzyme  ها فقط یک جایگاه برش دارد . این پلاسمید دارای دوژن مقاومت به آمپی سیلین و تترا سیکلین  میباشد و هنگامیکه وارد باکتری میشود باکتری نسبت به دو آنتی بیوتیک  مذکور مقاوم میشود.قسمتی از ترادف این پلاسمید  (705bp ) را که برای ادامه زندگی آن ضروری نمیباشد  با آنزیم HaeII برش داده و حذف کرده اند واز آن  پلاسمیدی بنام pT153 ساخته  اند که همانند سازی آن 5-3 برابر پلاسمید PBR322  میباشد .

ب) پلاسمید Bluescript sk  همانطور که در شکل دیده میشود ترادف ژن Lacz` ( قسمتN terminal  ژن β-galactosidase ) بطوری روی پلاسمید  تعبیه شده است که Multiple Cloning Site این پلاسمید قسمتی از ترادف ژن مذکور میباشد. (جایگاه برش آنزیمها درقسمت های مختلف ترادف پلاسمید PBR322 قرار دارند ) که  درمهندسی ژنتیک برای انتخاب کلنی های سفید باکتریایی حاوی  Recombinant DNA استفاده میشود.  در دو طرف MCS   این پلاسمید پروموتور فاژهای  T3 و T7 قرار داشته که  ژن کلون شده  را بر حسب Orientation  آن میتوان توسط هر یک از پروموتورهای  مذکور بیان ( Express) نمود .

  این پلاسمید دارای دو Original of Replication  است که یکی از باکتری E.coli  و دیگری از فاژ F1 گرفته شده است که به این علت فاژمید هم گفته میشود.. این پلاسمید برای تولید ssDNA    هنگام  Sequencing  یک قطعه  DNA هم قابل استفاده میباشد.  در Bluescript sk (M13) جایگاه آنزیم SacI بلافاصله در Downstream پروموتور فاژ T7 و جایگاه آنزیم KpnI بلافاصله در Downstream پروموتورفاژ T3 قراردارند. پلی کلونینگ سایت  Bluescript ks (M13))  در orientation مخالف  پلاسمید Bluescript sk (M13-)   قرار گرفته است.

منبع:http://vatankhahvet.blogfa.com